對于經(jīng)常做分子生物學實驗的人來說,PCR就如家常便飯,變性—退火—延伸,基本原理和過程一直沒變。隨著PCR技術(shù)的發(fā)展,研究人員推出了普通PCR的升級版本來解決PCR實驗過程中常常出現(xiàn)的擴增效率低,特異性差等問題,如現(xiàn)在已被我們熟知的溫度梯度PCR、降落PCR、巢式PCR等,這里我們先來說說梯度PCR,在進行PCR優(yōu)化時,研究者都會考慮退火溫度的優(yōu)化,這時就需進行梯度PCR。
梯度PCR是在一臺PCR儀上同時進行同一PCR反應時,以引物的理想退火溫度Tm-5作為為參考值,設置不同退火溫度,這些溫度對應PCR儀模塊的不同的孔,且呈現(xiàn)梯度遞增或遞減,更終摸索出針對這臺PCR儀和當前外在環(huán)境的合適的退火溫度。
雖然我們可以通過梯度PCR快速摸索出適合儀器的退火溫度,減少繁瑣的重復試驗,但在實際應用中仍然會遇到惱人的問題。經(jīng)常會有人困惑同一反應體系在原來的PCR儀上摸索出合適的退火溫度,當換到另一臺PCR儀(同一型號/不同品牌/不同型號)上進行相同的擴增反應時,或者更換耗材(PCR管等)后擴增效果并沒有之前理想。究其原因,主要是由于熱傳導效率的不同而導致反應管內(nèi)樣品的溫度和PCR儀模塊差異所造成的。梯度PCR摸索出的條件只有在PCR實驗、儀器、試劑和耗材等絕對一致時才是有效的,否則任何一個組成要素的改變都將會帶來新的不確定性。顯然要徹底解決以上問題,需要一款能夠?qū)崿F(xiàn)高效率的熱能傳導,并保持模塊溫度與樣品溫度高度一致的PCR儀來進行實驗。這時我們無需梯度PCR就可以解決模塊和樣品之間存在的溫度差異及差異的不確定性等諸多問題,同時這也大大簡化了PCR程序,更加省時、省試劑。
寶予德Life Eco PCR儀不僅具有30℃的更寬限梯度功能,而且擁有出色的控溫系統(tǒng),采用專有的TAS(溫度補償技術(shù)),有效避免了加熱模塊熱傳導的邊緣效應問題,為PCR實驗提供一流的穩(wěn)定性和均一性,確保實驗結(jié)果的可靠性和重復性。
此外,用戶可根據(jù)反應體系選擇Blook或Tube控溫模式,配合選用的試劑和優(yōu)質(zhì)的PCR管,實現(xiàn)更佳的擴增條件。
