基因擴(kuò)增PCR是專門用來(lái)檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測(cè)手段。它可以通過(guò)將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行擴(kuò)增的方法,測(cè)出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測(cè)方法可以測(cè)出普通檢驗(yàn)難以檢測(cè)出的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對(duì)樣品要求低等優(yōu)點(diǎn),因此被臨床醫(yī)生廣為認(rèn)可,已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測(cè)部門的禽疫病診斷。
基因擴(kuò)增PCR的試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū):
下述操作在該區(qū)進(jìn)行:貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。
貯存試劑和用于標(biāo)本制備的材料應(yīng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),不能經(jīng)過(guò)產(chǎn)物分析區(qū)。在打開含有反應(yīng)混合液的離心管或試管前,應(yīng)將其快速離心數(shù)秒。試劑原材料須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。當(dāng)貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后,應(yīng)將其分裝貯存?zhèn)溆茫苊庥捎诮?jīng)常打開反應(yīng)管吸液而造成污染。
含反應(yīng)混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴(kuò)增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。為避免因單次反應(yīng)取液而頻繁的凍融主貯存試劑,應(yīng)分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)一次測(cè)定所需的擴(kuò)增反應(yīng)數(shù)來(lái)決定。
主反應(yīng)混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定性通過(guò)預(yù)試驗(yàn)來(lái)檢查,評(píng)價(jià)結(jié)果須有書面報(bào)告。對(duì)于"熱啟動(dòng)"技術(shù),聚合酶也可不包含在主反應(yīng)混合液中。
在整個(gè)本區(qū)的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中,操作者須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個(gè)有效地防止污染的措施。 嚴(yán)禁用嘴吸取液體,加樣器和吸頭等須經(jīng)高壓處理。
工作結(jié)束后須立即對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔。本工作區(qū)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面應(yīng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的紫外照射應(yīng)方便有效。由于紫外照射的距離和能量對(duì)去污染的效果非常關(guān)鍵,因此可使用可移動(dòng)紫外燈,在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)上60~90cm內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百bp,對(duì)紫外線損傷不敏感,因此基因擴(kuò)增PCR片段須延長(zhǎng)照射時(shí)間,是照射過(guò)夜。實(shí)驗(yàn)室及其設(shè)備的使用須有日常記錄。
